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大鼠心肌原代細(xì)胞的處理方法介紹

更新時(shí)間:2023-02-13  |  點(diǎn)擊率:821
  心肌細(xì)胞培養(yǎng)作為一種體外研究模型,可以更便捷的從細(xì)胞和分子水平對(duì)其生長、發(fā)育、生理、代謝、病理等進(jìn)行研究。在許多研究領(lǐng)域原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞作為一種主要的研究模型,被廣泛應(yīng)用于心血管研究之中。
  原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)是體外研究心血管疾病相關(guān)機(jī)制的主要手段和基本技術(shù)。基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中,與細(xì)胞系相比,原代心肌細(xì)胞的形態(tài)及電生理方面更接近在體細(xì)胞,因此,培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞的質(zhì)量直接關(guān)系實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程及結(jié)果。
  大鼠心肌原代細(xì)胞的處理方法,給大家分享:
  1.大鼠的選擇
  新生大鼠鼠齡的選擇新生大鼠心肌細(xì)胞在出生后3 d內(nèi)具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌細(xì)胞則為終末分化細(xì)胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生時(shí)間越短,其心肌細(xì)胞分離后成活率越高,越容易貼壁生長。大量觀測表明,選擇1~3 d齡大鼠分離其心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)較為理想.其中尤以半日齡大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)效果較好。
  2.最常見的酶消化法
  0.1%的胰蛋白酶重復(fù)消化乳鼠心肌組織多次,收集的細(xì)胞用含15%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基混懸后過濾,純化心肌細(xì)胞后置CO2培養(yǎng)箱孵育。結(jié)果培養(yǎng)的心肌細(xì)胞4~6 h后開始貼壁生長,12~24 h明顯增殖,3~4 d后細(xì)胞匯合成片。在倒置顯微鏡下心肌細(xì)胞呈圓形,梭形,多角形,伸出偽足,出現(xiàn)自發(fā)性節(jié)律性搏動(dòng)。結(jié)論應(yīng)用酶消化法可簡便,快速地獲得大量活力高的心肌細(xì)胞。